ABI_7500熒光定量PCR儀操作方便、運行速度快、實(shí)驗結果準確,從不常見(jiàn)設備變成分子生物學(xué)實(shí)驗室的基礎設備。隨著(zhù)PCR技術(shù)的成熟運用,多重擴增越來(lái)越熱鬧,熒光定量PCR儀也不能幸免。該儀器發(fā)展到如今各個(gè)廠(chǎng)家都推出4通道、5通道甚至6通道熒光定量PCR儀,眼花繚亂的選擇讓人無(wú)所適從,就有人一不小心走進(jìn)了“通道越多越好”的誤區。
在使用有些廠(chǎng)家5通道的熒光定量?jì)x時(shí),為了確保實(shí)驗結果的精確性和準確性都要在實(shí)驗中使用ROX(一種熒光染料)或專(zhuān)用的Referencedye,這些熒光染料都必須單獨使用一個(gè)檢測通道。這樣以來(lái),真正能檢測多重PCR熒光信號的有效通道只有4個(gè),而且使用校正染料可能會(huì )增加后期的使用成本。有的熒光定量PCR的檢測通道是只為自已廠(chǎng)家的專(zhuān)用的熒光染料或試劑開(kāi)放的,有效檢測通道也絕非像宣傳資料中宣稱(chēng)的那么多。在購買(mǎi)前確認熒光定量PCR儀器的有效檢測通道尤為重要,不能單單只聽(tīng)宣傳。
考慮多重ABI_7500熒光定量PCR儀的通道數的時(shí)候也應該從實(shí)驗室實(shí)際情況出發(fā),多重PCR并非人人適用、人人可用,因為多重PCR必須要對退火溫度進(jìn)行優(yōu)化,在引物設計的時(shí)候就可能開(kāi)始考慮能不能放在一個(gè)反應體系內進(jìn)行反應,不同的反應需要的退火溫度不同,不合適的退火溫度會(huì )降低擴增效率,放大非特異性擴增,甚至擴增不出來(lái),它使實(shí)驗指數倍的復雜化了。臨床上因為有試劑廠(chǎng)家專(zhuān)門(mén)針對某些疾病開(kāi)發(fā)研制的多重檢測試劑盒,才需要用到3、4、5通道的檢測;科研用的熒光定量因為設計探針麻煩,基本上都用染料法,基本上單通道就能滿(mǎn)足。