Bio-Rad_PTC-200 PCR儀可以根據不同的DNA的片段及其引物,設計不同的擴增條件,從而實(shí)現樣本DNA在Taq酶的作用下達到指數性的增長(cháng)。廣泛應用于序列測定、遺傳分析、醫療診斷等樣品的前處理。
PCR(聚合酶鏈式反應)是利用DNA在體外攝氏95°高溫時(shí)變性會(huì )變成單鏈,低溫(經(jīng)常是60°C左右)時(shí)引物與單鏈按堿基互補配對的原則結合,再調溫度至DNA聚合酶最適反應溫度(72°C左右),DNA聚合酶沿著(zhù)磷酸到五碳糖(5'-3')的方向合成互補鏈。PCR儀實(shí)際就是一個(gè)溫控設備,能在95℃,55℃,72℃之間很好地進(jìn)行溫度控制。PCR擴增儀又稱(chēng)為PCR基因擴增儀、PCR核酸擴增儀、聚合酶鏈反應核酸擴增儀,是利用PCR(Polymerasechainreaction,聚合酶鏈反應)技術(shù)對特定DNA擴增的一種儀器設備,被廣泛運用于醫學(xué)、生物學(xué)實(shí)驗室中,例如用于判斷檢體中是否會(huì )表現某遺傳疾病的圖譜、傳染病的診斷、基因復制以及親子鑒定等。
Bio-Rad_PTC-200 PCR儀反應步驟:
分別是:1.Denaturation2.Annealingofprimers,3.Extensionofprimers。所謂Denaturing乃是將DNA加熱(至90~95℃)變性,將雙股的DNA加熱后轉為單股DNA以做為復制的模板.而Annealing則是令Primers于一定的溫度下(冷卻至55~60℃)附著(zhù)于模板DNA兩端。最后在DNA聚合酶e.g.Taq-polymerase的作用下(加熱至70~75℃)進(jìn)行引物的延長(cháng)Extensionofprimers及另一股的合成。
PCR的最早設想核酸研究已有100多年的歷史,二十世紀60年代末、70年代初人們致力于研究基因的體外分離技術(shù),Korana于1971年最早提出核酸體外擴增的設想:"經(jīng)過(guò)DNA變性,與合適的引物雜交,用DNA聚合酶延伸引物,并不斷重復該過(guò)程便可克隆tRNA基因"。
PCR技術(shù)的本質(zhì)是體外核酸擴增,加熱使雙鏈DNA解開(kāi)螺旋,在退火溫度條件下引物同模板DNA雜交,在TaqDNA聚合酶,dNTPs,Mg2+和合適pH緩沖液存在條件下延伸引物,重復“變性→退火→引物延伸”過(guò)程至25~40個(gè)循環(huán),呈指數級擴大待測樣本中的核酸拷貝數。